什么叫klenow酶

Klenow酶，也称为Klenow片段，是大肠杆菌DNA聚合酶I（E.coli DNA Polymerase I）的一个大片段。它由汉斯·克列诺（Hans Klenow）于1970年通过枯草杆菌蛋白酶（subtilisin）处理大肠杆菌DNA聚合酶I时得到。Klenow酶保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的5'→3'外切酶活性。

Klenow酶的主要特点和应用如下：

**活性定义** ：在37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸（dNTPs）掺入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。

**酶活性检测条件** ：在67mM potassium phosphate（pH7.4）、6.7mM MgCl2、1mM 2-mercaptoethanol、0.033mM dATP、0.033mM dTTP、0.4MBq/ml [H]-dTTP、62.5μg/ml poly（dA-dT）·poly（dA-dT）的条件下进行检测。

**纯度** ：不含DNA内切酶和RNase。

**储存溶液** ：25mM Tris-HCl（pH7.5）、0.1mM EDTA、1mM DTT、50%（v/v）glycerol。

**反应缓冲液** ：10X的反应缓冲液为500mM Tris-HCl（pH8.0 at 25℃）、50mM MgCl2、10mM DTT。

**缓冲液兼容性** ：在碧云天的内切酶反应缓冲液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性为100%，在1X B、1X G中的活性为100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反应缓冲液中的活性为100%。

**失活或抑制** ：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow酶失活。金属离子螯合剂、无机焦磷酸盐（PPi）、大剂量的无机磷酸盐（Pi）均对Klenow酶有抑制作用。

Klenow酶在多个生物学和分子生物学实验中具有广泛应用，例如：

- **双链DNA5'突出末端的补平** ：Klenow酶可以催化产生平末端，用于后续的平端连接。

- **双链DNA3'突出末端的打平** ：Klenow酶可以削平3'突出的DNA末端。

- **5'突出末端的标记** ：Klenow酶可以用于5'突出末端的标记。

- **随机引物法进行DNA标记** ：Klenow酶可以与随机引物一起用于DNA标记。

- **Sanger双脱氧法进行DNA测序** ：Klenow酶在Sanger测序法中用于延伸短链DNA。

- **cDNA第二链的合成或定点突变反应第二链的合成** ：Klenow酶在cDNA合成和定点突变反应中用于合成第二链。

综上所述，Klenow酶是一种重要的工具酶，广泛应用于分子生物学和生物化学研究中。